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技術(shù)服務(wù)

研究方法

01 技術(shù)原理

DNBelab C4技術(shù)是基于負壓的液滴微流控系統(tǒng)，通過引入自主專利的液滴標簽技術(shù)（Disc-seq:Droplet-indexed high-throughput single-cell sequencing），將帶有標簽的捕獲磁珠與單個細胞或者細胞核包裹在液滴中，采用Droplet index的技術(shù)實現(xiàn)磁珠的超泊松分布，在液滴中完成細胞裂解和捕獲mRNA或DNA分子及用于識別來自同一液滴磁珠的標簽序列，對cDNA和Droplet index進行文庫構(gòu)建和測序，即可一次性獲得大量細胞的基因表達或染色質(zhì)開放區(qū)基因信息。此技術(shù)與常規(guī)液滴單細胞測序技術(shù)如Drop-seq平臺1%-3%的細胞回收率相比，回收率提高至30%-60%，顯著提高了細胞的利用率，降低了單次細胞投入量。

02 技術(shù)流程

單細胞測序的一般流程包括細胞懸液制備、單細胞分離、裂解、擴增、建庫、測序、數(shù)據(jù)分析等步驟。

scRNA-seq

該技術(shù)基于便攜的負壓裝置將帶有標簽的mRNA捕獲磁珠與單個細胞或者細胞核包裹在液滴中，采用Droplet index的技術(shù)實現(xiàn)磁珠的超泊松分布，在液滴中完成細胞裂解和捕獲mRNA分子及用于識別來自同一液滴磁珠的標簽序列，對cDNA和Droplet index進行文庫構(gòu)建和測序，即可一次性獲得大量細胞的基因表達信息。

圖1 基于自主標簽技術(shù)（Disc-seq）的單細胞轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù) scRNA-seq

scATAC-seq

單細胞ATAC-seq從組織或細胞富集細胞核，然后利用Tn5轉(zhuǎn)座酶對染色質(zhì)開放區(qū)進行切割，通過DNBelab C4單細胞設(shè)備，包裹轉(zhuǎn)座后的細胞核和帶有標簽的磁珠，在液滴內(nèi)完成染色質(zhì)開放區(qū)的富集和擴增，后續(xù)可根據(jù)高通量測序流程制備文庫并進行測序及生信分析，轉(zhuǎn)座后細胞核投入芯片5,000-15,000，獲取1,500-9,000細胞，雙包率 <5%。